一、超濾離心管注意事項(xiàng)與技巧

1. MWCO選擇：選擇MWCO應(yīng)為目標(biāo)分子大小的 1/3 到 1/2。例如，濃縮100 kDa的蛋白，最好選擇30-50 kDa的MWCO。

2. 離心力是關(guān)鍵：嚴(yán)禁超過(guò)說(shuō)明書(shū)標(biāo)注的最大離心力！過(guò)高的離心力會(huì)壓縮膜結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致不可逆的損壞和通量下降。

3. 避免膜干燥：在任何時(shí)候（包括預(yù)處理后等待加樣的短暫時(shí)間）都不要讓膜變干，干燥會(huì)yongjiu性損壞膜。

4. 處理復(fù)雜樣品：對(duì)于高粘度（如細(xì)胞裂解液）、高鹽或含有脂質(zhì)的樣品，容易發(fā)生膜堵塞?？赏ㄟ^(guò)預(yù)先稀釋樣品、間歇式離心（離心5分鐘，混勻再離心）或選擇低吸附材質(zhì)的膜（如PES膜比纖維素膜更耐污染）來(lái)改善。

5. 減少非特異性吸附：對(duì)于低濃度或珍貴的蛋白樣品，可用含0.1% BSA或Tween-20的緩沖液預(yù)處理膜，以封閉膜的吸附位點(diǎn)，預(yù)處理后需用目的緩沖液再潤(rùn)洗一次。

6. 檢查膜完整性：如果懷疑膜已破損，可加入一種已知分子量的染料（如藍(lán)葡聚糖2000）離心，觀察濾液中是否有染料漏出。

二、超濾離心管常見(jiàn)問(wèn)題解答 (FAQ)

Q1: 離心速度很慢，甚至沒(méi)有濾液產(chǎn)生？

原因：膜發(fā)生堵塞。

解決方案：對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理（過(guò)濾或離心）；稀釋樣品；嘗試“間歇離心"模式；檢查離心力是否設(shè)置正確。

Q2: 目標(biāo)蛋白回收率低？

原因：非特異性吸附在膜或管壁上；膜被刺破；蛋白沉淀。

解決方案：使用低吸附材質(zhì)的超濾管；用BSA或Tween進(jìn)行預(yù)處理；回收時(shí)充分吹打；確保操作過(guò)程中膜未被損壞；優(yōu)化緩沖條件（如添加溫和還原劑）。

Q3: 濾液中有我的目標(biāo)蛋白（泄露）？

原因：選擇了MWCO過(guò)大的超濾管；膜破損。

解決方案：更換更小MWCO的超濾管；進(jìn)行膜完整性測(cè)試。

Q4: 濃縮后樣品體積遠(yuǎn)大于預(yù)期？

原因：樣品具有高粘度，膜上截留的液體無(wú)法被wanquan離心下去。

解決方案：適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍微提高離心力（在允許范圍內(nèi)）；回收時(shí)采用倒扣離心法。

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