sigma聚乙烯感染/轉(zhuǎn)染試劑(TR-1003-G)

產(chǎn)品介紹：

聚凝胺是一種陽(yáng)離子聚合物，可以大大提高逆轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒感染哺乳動(dòng)物細(xì)胞的效率。它起到中和病毒體與細(xì)胞表面之間電荷排斥的作用，從而提高感染效率。逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的效率在某些細(xì)胞中顯著提高了 100 到 1,000 倍，這是因?yàn)樵诟腥具^(guò)程中加入了聚凝胺。含有 DMSO 的聚凝胺儲(chǔ)液還用于介導(dǎo) DNA 轉(zhuǎn)移到多種細(xì)胞類型中，例如 CHO、雞胚成纖維細(xì)胞、NINH-3T3 和髓樣細(xì)胞。

產(chǎn)品應(yīng)用：

一、逆轉(zhuǎn)錄病毒感染

1.重組逆轉(zhuǎn)錄病毒儲(chǔ)液是通過(guò)將 5ml 生長(zhǎng)培養(yǎng)基（含 5％ 血清）添加接近匯合的轉(zhuǎn)染的逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞單層細(xì)胞的 100mm 平板中來(lái)制備的。24 小時(shí)后，去除培養(yǎng)基，并通過(guò) 0.45um 過(guò)濾器過(guò)濾。

2.將要感染該重組逆轉(zhuǎn)錄病毒儲(chǔ)液的細(xì)胞以每個(gè)100mm平板500,000個(gè)細(xì)胞的量接種在10mlwan全培養(yǎng)基中。

3. 24小時(shí)后，去除細(xì)胞的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。用2ml的病毒上清液（或?qū)⒉《緝?chǔ)液稀釋至 2ml）感染細(xì)胞，每毫升添加5ug至10ug的聚凝胺（最終濃度），在 37°C 下孵育細(xì)胞 3 到 6 小時(shí)。

加入 8 ml wan全培養(yǎng)基。感染三天后，將細(xì)胞按 1：5 的比例分進(jìn)選擇培養(yǎng)基。

二、轉(zhuǎn)染

將細(xì)胞鋪在wan全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，約有50％匯合。鋪板后18 至24 小時(shí)，立即使用以下方法制備DNA-培養(yǎng)基-聚凝胺溶液：(注意：必須按照正確的順序添加每個(gè)組件。)

1. wan全生長(zhǎng)培養(yǎng)基（60mm平板，2ml；100mm平板，3ml），加熱至37℃。

2. 質(zhì)粒DNA，10 ng至10 ug。輕輕混合。

3. 聚凝胺的最終濃度為每毫升5ug 至10ug。輕輕混合

4. 從平板中去除培養(yǎng)基，并將DNA-培養(yǎng)基-聚凝胺溶液添加到細(xì)胞中。讓細(xì)胞在 37℃下孵育6到20小時(shí)，前6個(gè)小時(shí)大約每1.5個(gè)小時(shí)輕輕搖動(dòng)一次。

5. 去除 DNA-培養(yǎng)基-聚凝胺溶液，并用DMSO 儲(chǔ)液輕輕覆蓋細(xì)胞（在1X HBSS 中的 15％ DMSO：專門(mén)培養(yǎng)基每個(gè)60 mm平板3 ml，每個(gè)100 mm平板4 ml。手動(dòng)搖動(dòng)培養(yǎng)皿10秒鐘，使溶液均勻分布，然后將細(xì)胞置于37℃下溫育4分鐘。

6. 立即去除DMSO儲(chǔ)液，并用wan全生長(zhǎng)培養(yǎng)基輕輕沖洗細(xì)胞兩次，每個(gè)60 mm培養(yǎng)皿每次洗滌用5 ml，每個(gè)100 mm培養(yǎng)皿每次洗滌用10 ml。

7. 將wan全生長(zhǎng)培養(yǎng)基添加到細(xì)胞中。

8. 若要獲得穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化子，則去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基，并將細(xì)胞按1：5比例分進(jìn)選擇培養(yǎng)基。

9. 若要瞬時(shí)表達(dá)，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基并添加新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。24至72小時(shí)后收獲細(xì)胞和/或培養(yǎng)基。

產(chǎn)品屬性：

外形：每毫升無(wú)菌超純水溶解10mg聚乙烯。

儲(chǔ)存及穩(wěn)定性：在-20℃可保存長(zhǎng)達(dá)2年。

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